欢迎光临浙江艾飞生物技术有限公司官网!

全国服务热线:0571-88576551

产品中心

PRODUCT CENTER

产品分类

Zeta-Life细胞增殖与凋亡

产品名称货号规格保存温度有效期价格品牌
Calcein AM/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒ZT10003-100T100T负20℃1年800Zeta Life
Calcein AM/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒ZT10003-500T500T负20℃1年1371Zeta Life

产品概述:

Calcein AM /PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒


钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI) 溶液,分别对活细胞和死细胞染色,可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。Calcein-AM的乙酸甲基酯亲脂性很高,使其可透过细胞膜。尽管Calcein-AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein-AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光 (激发: 490 nm,发射: 515 nm)。因此Calcein-AM仅对活细胞染色。另一方面,作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光 (激发: 535 nm,发射: 617 nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定Calcein-AM和PI的合适浓度。

包装规格                             

产品编号:ZT10003

规格:500T

-20℃保存,一年有效

I. 试剂  Calcein-AM 2mM 50uL in DMSO;  ·PI (1.5mM) 150uL in water

II. 用荧光显微镜观察细胞形态

以HeLa细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度,有不同的观察条件。根据细胞条件,摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。

1. 染色溶液的配制

1) 用1 ml无水DMSO溶解2 mg Calcein-AM,制备成2 mmol/l的Calcein-AM储备液,-20℃下密闭冷冻保存。

2) 用1 ml ddH2O溶解2 mg PI,制备成3 mmol/l的PI储备液,-20度下密闭冷冻保存,可以保存一年。

3) 将Calcein-AM储备液和PI储备液放置于室温。

4) 加5 µl Calcein-AM储备液和15 µL PI储备液至5 ml PBS中配制成染色溶液。Calcein-AM的终浓度为2 µmol/l,PI的终浓度为4.5 µmol/l。

2. 细胞染色

1) 染色HeLa细胞等贴壁细胞时,先用Trypsin-EDTA等消化细胞,制备成细胞悬液。

2) 将细胞悬液离心3分钟 (1,000 rpm)。

3) 去除上清液,加入PBS缓冲液,细胞数量调整至105-106个/ml。再用移液器充分混匀。

4) 由于培养基中的血清等含有酯酶,Calcein-AM遇水会分解,会导致空白上升,所以需要离心数次,用PBS洗涤数次直到完全洗净。

5) 将200 µl细胞悬液移至小试管中,加入100 µl染色溶液,在37℃下孵育15分钟。

6) 在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。

7) 在荧光显微镜下,先用490±10 nm波长激发,观察黄绿色的活细胞,还可以同时观察到红色的死细胞,然后用545 nm波长激发,能够看到红色的死细胞。

3. 染色试剂的最佳浓度

   Calcein-AM和PI最佳浓度根据不同的细胞种类而定,通过以下的操作,我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。

1) 通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。

2) 用0.1-10 µM PI溶液对死细胞染色,以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。

3) 用0.1-10 µM Calcein-AM溶液对死细胞染色,以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度。接着用该浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。

III. 注意事项

1) Calcein-AM的ester部位遇到湿气会分解,使用后请在-20度下密闭冷冻保存,防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。

2) 使用时一定要带手套、眼罩、口罩。万一接触到皮肤的话,迅速使用大量水清洗。


仅供科学研究使用,禁止用于它用。


联系我们

电话:0571-88576551

Q Q:461971675

手机查看

Copyright © 2023 浙江艾飞生物技术有限公司 All Rights Reserved.  备案号:浙ICP备2022021501号-1  技术支持:鼎诺传媒

本网站全力支持关于《中华人民共和国广告法》实施的“极限化违禁词”相关规定,且已竭力规避使用“违禁词”。
故即日起凡本网站任意页面含有极限化“违禁词”介绍的文字或图片或涉及文字及图片侵权等一律非本网站主观意愿并即刻失效,
不可用于客户任何行为的参考依据。凡访客访问本网站,均表示认同此条约!感谢配合!