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产品名称 | 货号 | 规格 | 保存温度 | 有效期 | 价格 | 品牌 |
Calcein AM/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒 | ZT10003-100T | 100T | 负20℃ | 1年 | 800 | Zeta Life |
Calcein AM/PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒 | ZT10003-500T | 500T | 负20℃ | 1年 | 1371 | Zeta Life |
产品概述:
Calcein AM /PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒
钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI) 溶液,分别对活细胞和死细胞染色,可用于同时对活细胞和死细胞进行荧光染色。Calcein-AM的乙酸甲基酯亲脂性很高,使其可透过细胞膜。尽管Calcein-AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内的酯酶作用,Calcein-AM能脱去AM基,产生的Calcein能发出强绿色荧光 (激发: 490 nm,发射: 515 nm)。因此Calcein-AM仅对活细胞染色。另一方面,作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核,并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光 (激发: 535 nm,发射: 617 nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发,仅可观察到死细胞。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,我们建议个别确定Calcein-AM和PI的合适浓度。
包装规格
产品编号:ZT10003
规格:500T
-20℃保存,一年有效
I. 试剂 Calcein-AM 2mM 50uL in DMSO; ·PI (1.5mM) 150uL in water
II. 用荧光显微镜观察细胞形态
以HeLa细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度,有不同的观察条件。根据细胞条件,摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。
1. 染色溶液的配制
1) 用1 ml无水DMSO溶解2 mg Calcein-AM,制备成2 mmol/l的Calcein-AM储备液,-20℃下密闭冷冻保存。
2) 用1 ml ddH2O溶解2 mg PI,制备成3 mmol/l的PI储备液,-20度下密闭冷冻保存,可以保存一年。
3) 将Calcein-AM储备液和PI储备液放置于室温。
4) 加5 µl Calcein-AM储备液和15 µL PI储备液至5 ml PBS中配制成染色溶液。Calcein-AM的终浓度为2 µmol/l,PI的终浓度为4.5 µmol/l。
2. 细胞染色
1) 染色HeLa细胞等贴壁细胞时,先用Trypsin-EDTA等消化细胞,制备成细胞悬液。
2) 将细胞悬液离心3分钟 (1,000 rpm)。
3) 去除上清液,加入PBS缓冲液,细胞数量调整至105-106个/ml。再用移液器充分混匀。
4) 由于培养基中的血清等含有酯酶,Calcein-AM遇水会分解,会导致空白上升,所以需要离心数次,用PBS洗涤数次直到完全洗净。
5) 将200 µl细胞悬液移至小试管中,加入100 µl染色溶液,在37℃下孵育15分钟。
6) 在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。
7) 在荧光显微镜下,先用490±10 nm波长激发,观察黄绿色的活细胞,还可以同时观察到红色的死细胞,然后用545 nm波长激发,能够看到红色的死细胞。
3. 染色试剂的最佳浓度
Calcein-AM和PI最佳浓度根据不同的细胞种类而定,通过以下的操作,我们可以找到不同细胞染色试剂的最佳浓度。
1) 通过在0.1%皂苷或0.1-0.5%毛地黄皂苷中孵育10分钟或通过在70%乙醇中孵育30分钟制备死细胞。
2) 用0.1-10 µM PI溶液对死细胞染色,以便找到仅对细胞核染色而不对细胞质染色的PI浓度。
3) 用0.1-10 µM Calcein-AM溶液对死细胞染色,以便找到不对细胞质染色的Calcein-AM浓度。接着用该浓度的Calcein-AM对活细胞染色以检验活细胞可否被染色。
III. 注意事项
1) Calcein-AM的ester部位遇到湿气会分解,使用后请在-20度下密闭冷冻保存,防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。
2) 使用时一定要带手套、眼罩、口罩。万一接触到皮肤的话,迅速使用大量水清洗。
仅供科学研究使用,禁止用于它用。
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